Иммуноферментный анализ

Содержание статьи

Иммуноферментный анализ

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, и приводимая ниже информация носит исключительно справочный характер.

Иммуноферментный анализ: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов.

Иммуноферментный анализ (ИФА, англ. Enzyme immunoassay, EIA) -лабораторный метод определения различных соединений (макромолекул, вирусов и пр.), в основе которого лежит реакция антиген-антитело.

Генетически чужеродные вещества, попадая в организм человека, вызывают специфические процессы, направленные на удаление этих веществ. Система организма, выполняющая данную функцию, называется иммунной системой, а сами процессы — иммунологическими.

Иммунная система представляет собой совокупность лимфоидных органов, которые функционируют согласованно за счет миграции лимфоцитов из крови в ткани и из ткани в кровь, медиаторов (посредников) и других факторов.

В- и Т-лимфоциты

Иммунная система слагается из центральных и периферических органов. К центральным относят тимус и костный мозг. В них лимфоциты дифференцируются (созревают) до стадии функционально активной клетки. К периферическим органам иммунной системы принадлежат лимфатические узлы, селезенка, лимфоидные структуры пищеварительного тракта, аппендикс, миндалины. В этих органах лимфоциты контактируют с антигеном, взаимодействуют между собой и с другими элементами иммунной системы.

Практически все периферические органы иммунной системы являются фильтрами или барьерами для распознавания, захвата и расщепления антигена.

Антиген (англ. antigen от antibody-generator — «производитель антител») — любое вещество, несущее признаки генетически чужеродной информации, которое организм рассматривает как чужеродное или потенциально опасное и против которого начинает вырабатывать антитела (иммунный ответ).

Способность антигенов вызывать иммунный ответ называется иммуногенностью, а способность образовывать комплексы с антителами — антигенностью.

К антигенам относятся белки, полисахариды, нуклеиновые кислоты, в том числе и в составе компонентов различных биологических структур (клеток, тканей, вирусов и т.д.).

Антитела (англ. antibody) — это специальные белки иммуноглобулины (Ig), которые вырабатывает иммунная система в ответ на попадание любого чужеродного агента в организм для борьбы с ним.

Антитела обладают способностью образовывать прочные комплексы с антигенами для последующего удаления их из организма.

Иммуноглобулины (Ig) по своей химической структуре относятся к гликопротеидам (белкам, содержащим в своей структуре олигосахариды). По своим свойствам и структурным особенностям иммуноглобулины подразделяются на пять основных классов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM.

В организме антитела вырабатываются клетками крови — В-лимфоцитами. На своей поверхности эти клетки имеют рецепторы, с помощью которых они могут узнавать чужеродный антиген.

Антиген, встречаясь в кровотоке с соответствующим ему рецептором В-лимфоцита, активирует его. В-лимфоцит многократно делится и образует клон плазматических клеток. Каждый клон клеток секретирует однородные по своей структуре антитела.

Острые и хронические бактериальные, вирусные и паразитарные инфекции (болезнь Боткина, сепсис, пневмония, лейшманиоз, туберкулез, лепра и др.), подозрение на СПИД.

Аутоиммунные заболевания (ревматическая болезнь, ревматоидный артрит, системная красная волчанка и др.).

Аллергические заболевания (бронхиальная астма, поллиноз и др.).

Злокачественные заболевания (лейкозы, лимфогрануломатоз и др.).

Кожно-венерические заболевания (контактный дерматит, пузырчатка, микоз, сифилис и др.).

Патология беременности.

Контроль цитостатической, иммунодепрессивной и иммуностимулирующей терапии.

Обследование пациентов до и после трансплантации.

Первичные иммунодефицитные состояния и др.

Постановка иммунологического диагноза складывается из следующих этапов:

Сбор иммунологического анамнеза.
Выявление клинических проявлений иммунопатологии.
Иммунологические методы исследования.

В лабораторных исследованиях наибольшее распространение получил твердофазный иммуноферментный анализ.

В иммуноферментном анализе применяют ферменты, которые могут связывать антитела или антигены, меняют окраску специального хромогенного субстрата при взаимодействии с ним и могут быть зарегистрированы физико-химическим методом (методом спектрофотометрии, флуориметрическим, люминисцентным и др.).

На настоящий момент имеются усилительные системы, позволяющие регистрировать наличие всего нескольких сотен молекул ферментов в 1 мл раствора.

Фермент — это сложное органическое вещество, вырабатываемое живой клеткой, способствующее различным химическим реакциям, происходящим в организме.

Хромогенный субстрат — это вещество белковой природы, приобретающее определенную окраску после расщепления специфическим протеолитическим ферментом.

Фотометрический анализ — метод качественного и количественного анализа, основанный на избирательном поглощении инфракрасного, видимого или ультрафиолетового излучения молекулами определяемого компонента или его соединения с соответствующим реагентом.

При проведении иммуноферментного анализа в качестве твердой фазы используется поверхность лунок полистиролового планшета, на которую адсорбированы входящие в состав тест-системы известные антитела (против определяемого антигена).

В лунку вносят исследуемую сыворотку крови. При наличии искомого антигена он соединяется с антителом, и образуются комплексы. Лунки промывают и удаляют не связавшиеся компоненты. В лунки вносят антитела к искомому антигену, меченые ферментом. Меченые антитела присоединяются к предыдущему комплексу и также остаются на стенках. Затем в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат (перекись водорода) и хромоген (ортофенилендиамин). Если в исследуемой жидкости был антиген, фермент взаимодействует с перекисью водорода и разлагает его. Выделившийся при этом кислород окрашивает хромоген в желтый цвет. По интенсивности окрашивания, возникающего в результате реакции фермента и субстрата, можно судить о количестве антигенов.

По аналогичной схеме работают тест-системы для определения антител, но в качестве иммуносорбента в них используются антиген, а раствор, который добавляют, содержит раствор антигенов, меченых ферментом.

В клинической диагностике с помощью фиксированных на твердой фазе антител (антигенов), определяют присутствие антигенов микроорганизмов, антител к ДНК, иммунных комплексов, антигенов раковых клеток, антител к различным видам бактерий, вирусов, простейших.

Метод ИФА может применяться для диагностики:

Вирусных заболеваний:

ВИЧ-инфекции;
вирусных гепатитов;
цитомегаловирусной инфекции;
вируса Эпштейн-Барр;
герпетической инфекции;
коронавирусной болезни.

Для диагностики инфекций, передающихся половым путем:

сифилиса;
хламидиоза;
трихомониаза;
гонореи;
уреаплазмоза.

Уровня гормонов в эндокринологии.
Аутоантител и маркеров онкологических заболеваний в онкологии.
Общего IgE и специфических IgE антител в аллергологии.
Лекарственных препаратов, наркотиков в биологических образцах.
Белков сыворотки крови (ферритина, фибронектина и др.).

Подготовка к процедуре

Взятие пробы для лабораторного исследования методом ИФА должно проводиться:

желательно с 7 до 9 часов утра;
натощак, т.е. через 8-12 часов после последнего приема пищи;
после воздержания от алкоголя не менее 24 часов;
до проведения диагностических и лечебных процедур;
в ряде случаев следует учитывать фазу менструального цикла, фармакодинамику лекарственных препаратов, циркадные ритмы.

Пациент должен находиться в спокойном состоянии не менее 15 минут: сидя или лежа. Наложение жгута (манжеты) не должно превышать 1 мин.

Преимущества иммуноферментного анализа по сравнению с другими методами определения антигенов и антител:

высокая чувствительность (ИФА может обнаруживать одиночные молекулы анализируемого вещества);
возможность использования минимальных объемов исследуемого материала;
стабильность всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА при хранении;
простота проведения реакции;
возможность автоматизации всех этапов реакции;
относительно низкая стоимость диагностических наборов.

Иммуноферментный анализ может давать ложноположительный результат:

при наличии ревматоидного фактора в крови, который является антителом против собственных IgG;
при различных системных заболеваниях;
при нарушениях обменных процессов в организме;
при приеме некоторых лекарственных препаратов;
у новорожденных детей.

Источники:

Л. К. Решетникова. Иммунология. — Благовещенск, 2019. — 176 с.
Гусякова О.А. Иммуноферментный анализ: учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического, медико-профилактического факультетов, Самара: типография Клиник ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2010. — 32 с.

ВАЖНО!

Информация проверена экспертом

Иммуноферментный анализ

Лишова Екатерина Александровна

Высшее медицинское образование, опыт работы — 19 лет

Источник

Анализ крови на аллергены

Одним из методов, применяющихся при диагностике аллергических заболеваний, являются специфические анализы крови на аллергены, которые позволяют не только определить степень сенсибилизации и тип чужеродного для организма вещества, но и установить его роль в развитии данного аллергического заболевания.

Что собой представляет анализ крови на аллергены?

Определение аллергена по крови — это высокоинформативная, абсолютно безопасная диагностическая методика, которая проводится in vitro, то есть не требует непосредственного участия человека. При однократном применении данное лабораторное исследование позволяет выявить в сыворотке, плазме или цельной крови больного наличие специфических антител к неограниченному количеству аллергенов. В том случае, когда при проведении кожных аллергопроб существует вероятность развития сильной аллергической реакции, подобный анализ является единственно возможным способом диагностики.

Все лабораторные тесты, предусматривающие использование крови, условно подразделяются на специфические и неспецифические. В качестве исследований второго вида, направленных на выявление общих изменений в иммунной системе пациента, применяется клинический анализ крови, определение уровня С-реактивного белка, характеристика иммунокомпетентных клеток и пр.

Специфическая диагностика аллергенов включает в себя определение и измерение уровня аллергенспецифических иммуноглобулинов IgG/IgG4, являющихся биомаркерами гиперчувствительности к чужеродным белкам.

Методы специфической аллергодиагностики

Иммуноферментный анализ на определение аллергена. Данное исследование назначается для измерения количества специфических иммуноглобулинов IgE в крови больного. В норме показатель общего иммуноглобулина находится в пределах 20-120 ед./мл. При наличии аллергии этот порог значительно повышен.
Комплексный анализ пищевых аллергенов — определение специфических иммуноглобулинов IgG4, сгруппированных в так называемые аллергопанели (пищевые группы), оптимально подобранные по перекрестным реакциям.
RAST-тест (радиоаллергосорбент). Данный анализ используется для определения концентрации в крови иммуноглобулинов IgE и IgG. С его помощью обнаруживается аллергия, однако не определяется степень чувствительности к вызывающему ее чужеродному белку.
Иммунофлюоресцентный анализ на аллергены на сегодняшний день считается «золотым стандартом» в диагностике аллергических патологий. При помощи метода ImmunoCap, являющегося истинным количественным тестом, производится оценка концентрации IgE в сыворотке крови и определяется функциональное состояние организма. При проведении исследования используются индивидуальные аллергены (около 280 шт.), панели пищевых и ингаляционных аллергенов, панели для определения аллергенов животных, пылевых клещей, трав, грибков и пр.
MAST-тест позволяет выявить изменения функциональной активности фагоцитов при их взаимодействии со специфическими агентами.
Иммуноблот является высокоспецифичной и высокочувствительной референтной методикой, подтверждающей диагноз при положительном или неопределенном результате ИФА.
Иммунохроматографический анализ — это пробы на аллергены, предусматривающие использование специальных экспресс-тестов. Данный метод применяется при исследовании сыворотки, плазмы или цельной крови.

Показания к проведению лабораторного исследования

Атопический дерматит, экзема, нейродермит и другие патологические состояния, сопровождающиеся значительным поражением кожных покровов.
Повышенная кожная чувствительность, способная спровоцировать ложноположительные или ложноотрицательные результаты.
Дискомфорт при проведении кожных тестов.
Выраженный дермографизм (кожная реакция на механическое раздражение).
Необходимость постоянного приема противоаллергических препаратов, снижающих чувствительность к аллергенам при проведении кожных тестов.
Грудной возраст.
Наличие в анамнезе анафилаксии или вероятность ее развития.

В клинике АВС-МЕДИЦИНА в Москве, предоставляющей широкий спектр амбулаторно-поликлинических услуг, реализован комплексный подход к проблеме диагностики и лечения аллергопатологий. У нас Вы сможете сдать анализ крови на аллергены, цена которого зависит от метода диагностики, а также при необходимости пройти полноценный курс лечения, разработанный в соответствии с мировыми стандартами терапии гистаминзависимых аллергических заболеваний.

Источник

ИФА-анализ крови: когда применяется?

Всем известно, что лечению любого заболевания предшествует диагностика. Чем раньше и точнее поставлен диагноз, тем больше шансов на успешное и полное излечение пациента. О том, что представляет собой такой анализ, как ИФА, кому он назначается и как «работает», рассказывает врач-детский инфекционист «Клиника Эксперт» Тула Елена Геннадьевна Королёва.

— Елена Геннадьевна, ИФА-анализ крови — что это такое? Расскажите о его принципе.

— С помощью иммуноферментного анализа (сокращённо ИФА) происходит выявление в крови специфических антител, представляющих собой молекулы иммуноглобулинов (часто обозначаются так: Ig). Антитела вырабатываются иммунной системой организма в ответ на внедрение в него чужеродных агентов — например, вирусов, бактерий. То есть этот анализ показывает реакцию организма на инфекцию, которая была у человека или присутствует в настоящее время. Это так и называется: ИФА-анализ на антитела. Самих возбудителей болезни, их антигены, с помощью этого вида анализа не найти.

«Каковы отличия вирусов и бактерий, и какое это имеет значение при лечении инфекционных заболеваний?».

Цитата из материала «Вирусы и бактерии — в чём принципиальное отличие?»

Есть несколько классов иммуноглобулина, которые образует иммунная система. Они вырабатываются в зависимости от срока внедрения патогена в организм и по-разному называются. Например, наличие иммуноглобулина класса M (IgM) свидетельствует об острой фазе инфекционного процесса — значит, человек болен именно в этот конкретный момент. А вот иммуноглобулин G (IgG) начинает вырабатываться после двух недель борьбы организма с инфекцией. Если присутствуют оба типа, это говорит о том, что инфекция протекает уже относительно длительное время, но острая фаза пока ещё не закончилась. Но в случае, когда присутствует хроническая инфекция, появление IgМ может говорить о её обострении и течении острой фазы на фоне хронического процесса.

Хотите подробнее узнать об иммунной системе? Читайте нашу статью

— Когда назначается иммуноферментный анализ? Метод используется только для диагностики инфекций?

— Метод ИФА назначается, если врач заподозрил у пациента не явную, скрытую инфекцию, и её предстоит выявить. Ещё этот метод выступает в роли скрининга после прививок: он применяется, когда необходимо определить, есть ли у человека защита, скажем, от кори или иных инфекционных заболеваний — то есть анализ показывает, имеются ли антитела к тем или иным инфекциям, надо этого человека прививать или нет.

Читайте материалы по теме:

Непривитые дети — самые здоровые?

Прививки: где правда, а где ложь?

Кто придумал прививки?

— Что может выявить ИФА крови?

— Если лаборатория обладает определёнными возможностями, иммуноферментный анализ может выявить абсолютно любую инфекцию. Например, разработан ИФА анализ крови на паразиты (в том числе на гельминты), на герпес, гепатит и многие другие инфекционные патогены. Для выполнения теста нужно соответствующее оборудование, скрининговые программы. Но есть и ещё один существенный момент. Современные лабораторные анализаторы устроены так, что одному человеку ИФА не делается, т. е. необходимо ждать, когда пациентов, которым надо сделать такой же анализ, наберётся определённое количество, только тогда лаборатория возьмётся за эту работу. Например, для выявления ветряной оспы какой-то лаборатории нужны как минимум 50 человек. И это зависит не от прихоти её сотрудников — дело в том, что для лаборатории рентабельнее делать именно несколько анализов одновременно. Поэтому, чтобы меньше ждать, лучше обращаться в крупные лаборатории с большой проходимостью пациентов.

— Насколько чувствителен иммуноферментный анализ? Есть ли вероятность того, что он не обнаружит свою «цель», в то время как она в организме есть? И если да, то почему такое может быть?

— Если под целью подразумевать сам вирус, то, повторю, ИФА это не делает, его задача — обнаружить именно реакцию организма на инфекцию, специфические антитела к патогену. Если же под целью понимаются антитела, то, к сожалению, бывает и так, что ИФА их не обнаруживает. Результат может оказаться как ложноположительным, так и ложноотрицательным. Например, у беременных женщин со второй группой крови зачастую получают ложноположительный анализ на гепатит С. Т.е. на самом деле никаких антител к вирусу гепатита С в организме этой женщины нет, а анализ говорит об обратном. Увы, современная медицина затрудняется объяснить это. Поэтому, если врач наблюдает явные симптомы, видит, что человек болен, но при этом полученные результаты ИФА отрицательны, надо идти дальше и назначать другой, более специфичный анализ.

Кстати, ложноположительный результат на гепатит С может получиться и в случае, если накануне сдачи анализа человек выпил красного вина. В подобных случаях очень многое зависит от опыта врача, и ему решать, верить результатам анализа или продолжать исследования.

Подробнее о гепатите С читайте в нашей статье

— Есть ещё один современный анализ, известный как ПЦР — полимеразная цепная реакция. Она не может заменить иммуноферментный анализ? Если нет, то почему?

— Знаете, для инфекциониста это звенья одной цепи, одного процесса. В отличие от ИФА, ПЦР выявляет непосредственно ДНК или РНК самого вируса или бактерии. Но здесь одна особенность. Брать секрет нужно непосредственно из очага поражения — оттуда, где этот вирус или бактерия размножается. Скажем, гепатиты или ВИЧ — да, их можно обнаружить с помощью ПЦР, взяв у больного кровь. А вот если у человека пневмония, вызванная каким-то экзотическим грибком, анализ крови покажет отрицательный результат, и надо брать мокроту непосредственно из лёгких посредством бронхоскопии. Если речь идёт о других органах — скажем, о печени, — проводится биопсия.

Кроме того, ПЦР может показать ложноположительный результат, отреагировав на какие-то «обломки» молекул вируса — при том, что самого вируса, инфекции как таковой в организме уже может не быть. То есть противопоставлять эти два метода диагностики нельзя. ИФА и ПЦР неразрывно связаны между собой и дополняют друг друга, сводя к минимуму риск постановки неверного диагноза.

Беседовал Игорь Чичинов

Редакция рекомендует:

Диагностика инфекций методом ПЦР: что это такое?

Микроб, открой «личико»!

Чем опасны ТОРЧ-инфекции?

Для справки

Королёва Елена Геннадьевна

В 1992 г. окончила педиатрический факультет Киргизского государственного медицинского института.

С 1992 по 1993 г. — интернатура по детской инфекции.

Работала в республиканской инфекционной больнице (г. Бишкек) детским инфекционистом. Затем — реаниматолог в отделении интенсивной терапии для инфекционных больных.

В Туле более 10 лет работала в областной детской больнице, 7 лет заведовала отделением реанимации.

В настоящее время — врач, детский инфекционист, детский анестезиолог-реаниматолог «Клиники Эксперт» Тула. Принимает по адресу: г.Тула, ул. Болдина,74.

Источник