Методы диагностики in vitro

Эффективность терапии и профилактики во многом определяется качеством диагностических мероприятий, направленных на выявление причин и факторов, способствующих возникновению, формированию и прогрессированию аллергических заболеваний.

Методы диагностики аллергических заболеваний включают:

1. Сбор аллергоанамнеза (анамнеза болезни и жизни пациента).

2. Объективное обследование больного.

3. Данные инструментальных методов обследования (рентген, спирометрия, эндоскопия и т. д.).

4. Данные аллергологического тестирования in vivo.

5. Данные лабораторных исследований.in vitro

6. Данные эффективности назначенной терапии.

Аллергодиагностика решает следующие задачи:

ü Дифференциальная диагностика ряда заболеваний:

o атопических заболеваний кожи,

o аллергического ринита, конъюнктивита,

o эндогенной и экзогенной бронхиальной астмы,

o аллергического бронхолегочного аспергиллеза,

o заболеваний легких с астматическим компонентом в сочетании с системными

заболеваниями,

o иммунодефицитов, миеломной болезни.

ü Диагностика пищевой аллергии.

ü Диагностика лекарственной аллергии.

ü Выявление причинного аллергена.

ü Дифференцирование аллергических состояний от симптоматически сходных заболеваний – пищевой непереносимости, др. видов гиперчувствительности, псевдоаллергических и анафилактоидных реакций.

ü Прогноз тяжести аллергического заболевания.

ü Подбор аллергенов для специфической иммунотерапии.

ü Мониторинг и контроль результатов терапии и элиминационных мероприятий.

Методы аллергодиагностики можно разделить на in vivo (инвазивные) и in vitro (неинвазивные).

К методам in vivo относятся :

1)различные виды кожных проб (прик-тесты, скарификационные, и внутрикожные пробы с разными (стандартными наборами аллергенов).

При проведении тестов на кожу наносятся или в/кожно вводятся аллергены. По реакции на них (покраснение, появление аллергической реакции в месте нанесения/введения аллергена) судят о наличии аллергии

n внутрикожные пробы — применяются для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального и грибкового происхождения; для определения степени чувствительности к аллергенам неинфекционной природы;

n прик-тест — применяют для диагостики реагинового типа аллергических реакций, например, пищевой, лекарственной, пыльцевой аллергии.

n Patch-тестычаще всего используют для выявления сенсибилизации на косметические средства и металлы

n В России благодаря невысокой стоимости и доступности определения, до настоящего времени наиболее распространенным является скарификационный тест.

n Аппликационные пробы— растворы стандартизованных аллергенов наносят на специальный аппликатор (пластырь).

Тесты выполняют на коже спины, предплечья.

Результаты учитывают через 20–30 мин

Реакция оценивается следующим образом:

в виде эритемы и отека — +, в виде папул — ++, с наличием волдыря- +++.

Положительный результат свидетельствует о наличии сенсибилизации организма к тому или иному аллергену. Степень выраженности реакций коррелирует с активностью патологического процесса и тяжестью течения заболевания.

Применяют для выявления аллергических реакций на пищевые, ингаляционные и др. аллергены, используются для диагностики контактной сенсибилизации на лекарственные препараты, химические аллергены, ионы металлов

Пример: Скарификационные пробы

Внутрикожные пробы

n классические— способ введения аллергена внутрь кожи.

В основе- локальная ответная реакция на введение аллергена сенсибилизированному индивидууму, которая может развиваться по немедленному и замедленному типу реакций гиперчувствительности.

Результаты реакции :

n ГНТ регистрируют через 20–30 мин

n ГЗТ — через 48–72 ч.

Применяется для:

n диагностики ГЗТ

n для выявления дефицитов Т-клеточного звена

n Внутрикожная проба ставится путем инъекции в эпидермис 0,1 мл раствора аллергена

n Типичным примером является проба Манту.

Пример :Прик-тесты — способ проведения внутрикожных проб для диагностики ГНТ.

Специальную металлическую или пластиковую иглу с ограничителем погружают в раствор аллергена и прокалывают кожу на глубину 1мм.

В качестве (+)- контроля используют 10% р-р гистамина, а (-)- растворитель.

Результат учитывают через 15–20 мин измеряя диаметр папулы в двух направлениях.

При проведении скрининга или диагностики в случае отсутствия явных указаний на определенный аллерген приходится ставить прик-тесты на несколько аллергенов.

Для упрощения и стандартизации процедуры применяют мультитестовый аппликатор — одноразовое устройство для одномоментной постановки кожных проб с аллергенами

Оценка кожных проб

n Результат кожных реакций немедленного типа учитывают через 15–20 мин.

Он может быть:

n а) отрицательным — аналогичен контрольному;

n б) сомнительным (±) — наличие только гиперемии (без волдыря);

n в)слабоположительным (+) — наличие волдыря размером 3 мм;

n г) положительным (++) — наличие четко выраженного волдыря (до 5 мм);

n д) резкоположительным (+++) — наличие волдыря величиной не более 10 мм (с гиперемией и псевдоподиями);

n е) очень резко положительным (++++) — наличие волдыря величиной свыше 10 мм (с гиперемией и псевдоподиями).

Существует ряд состояний, при которых кожные пробы не рекомендованы или противопоказаны:

· ранний возраст пациента (до 3-х лет кожные пробы запрещены),

· опасность возникновения анафилактического шока,

· рецидивирующий характер крапивницы,

· массовая пораженность кожи при тяжелом атопическом дерматите, выраженный дермографизм, ихтиоз,

· коллагенозы, васкулиты, туберкулез, тромбоцитопения,

· гематологические заболевания,

· обострение хронических аллергических заболеваний,

· психические заболевания, эпилепсия,

· риск сенсибилизации при необходимости тестировать большое количество аллергенов,

· отказ пациента от кожных проб;

неадекватны (во время лечения антигистаминными препаратами, бронхоспазмалитиками, бета-2-адренонеметиками, кортикостероидами при невозможности отменить курс лечения);

неспецифичны — ответ на консервант или стабилизаторы в препарате аллергена;

неинформативны — низкая специфичность ответа на пищевые аллергены (порядка 50 — 60%), аллергены домашней пыли, клещи; большая вероятность перекрестных реакций (особенно в сезон поллинации). Кожные тесты могут быть ложноположительными из-за присутствия в некоторых пищевых аллергенах веществ-гистаминлибераторов.

2)Аллергические провокационные пробы —

биологические пробы in vivo, позволяющие выявить у человека аллергию немедленного типа к определенному аллергену.

n Основаны на введении аллергена в орган-мишень.

n Являются более достоверными, чем кожные пробы

n используются в случае расхождения данных анамнеза и результатов кожного тестирования

2.1.Назальная проба ( для диагностики аллергического ринита, сенной лихорадки, при сомнительных результатах кожного тестирования):

n на слизистую одной из половин носа наносят каплю физ.р-ра (-)- контроль. Если через 15 мин на ней не возникает реакция, то на слизистую второй половины носа наносят каплю аллергена в концентрации, давшей сомнительный результат при кожном тестировании.

Тест считается (+)- при развитии отека слизистой, ринореи, чихания.

2.2.Ингаляционная проба проводится при (-)- результатах кожных проб для диагностики профессиональной бронхиальной астмы на такие аллергены, как формальдегид, азотистый кобальт, бихромат калия, хлористый никель.

• Проба проводится на установке с замкнутым дыхательным контуром, которая создает небольшое избыточное давление на вдохе/выдохе.

Позволяет оценить степень и уровень спазма бронхолегочного дерева (для бронхиальной астмы характерен спазм мелких бронхов и бронхиол). Вначале проводят ингаляцию дист. водой (контроль), а затем — испытуемым аллергеном.

При появлении признаков бронхоспазма (система позволяет регистрировать их до развития симптомов астмы) аллерген выводится из дыхательной смеси, а больному оказывается необходимая помощь.

2.3.Сублингвальная пробаиспользуется для диагностики пищевой и лекарственной аллергии.

n Аллерген наносится на слизистую оболочку подъязычной области. При пищевой аллергии применяются натуральные продукты в разведении 1:10, при лекарственной — 1/8–1/4 разовой дозы растворенного вещества.

Тест считается (+)- при появлении в подъязычной области гиперемии, отека, зуда, а также при учащении пульса, чиханье, кашле.

2.4.Конъюнктивальная пробаприменяется для диагностики аллергического конъюнктивита и выявления аллергенов, вызывающих его развитие.

• в конъюнктивальный мешок, отодвинув нижнее веко, закапывают 1–2 капли тест-контрольной жидкости.

При отсутствии изменений конъюнктивы через 15–20 мин переходят к исследованию с аллергеном.

Аллерген (1–2 капли) закапывают в концентрации, которая дала слабоположительную кожную пробу.

При положительной реакции проявляются слезотечение, гиперемия конъюнктивы, зуд век.

Методы диагностики in vitro

n Диагностика аллергии по анализам крови — современное направление в аллергологии.

n В отличие от кожных проб и провокационных тестов анализы крови не приводят к развитию аллергических реакций у пациента, практически не имеют противопоказаний и рекомендуются при любой форме аллергии.

Основными показаниями являются:

n ранний детский возраст;

n высокая степень сенсибилизации пациентов;

n непрерывно рецидивирующее течение заболевания без периодов ремиссии;

n невозможность отмены антигистаминных и других препаратов;

n поливалентная сенсибилизация, когда отсутствует возможность проведения тестирования in vivo сразу со всеми предполагаемыми аллергенами в ограниченные сроки обследования;

n резко измененная реактивность кожи;

n ложноположительный или ложноотрицательный результат при кожном тестировании;

n уртикарный дермографизм.

Основными преимуществами методов специфической диагностики
in vitro являются:

n безопасность для больного;

n высокая стандартность и воспроизводимость;

n возможность количественного (цифрового) учета;

n возможность автоматизации;

n возможность проведения исследования в случае, когда пациент находится от аллерголога на большом расстоянии и доставлена лишь сыворотка больного;

n малое количество крови для исследования.

К методам диагностики in vitro можно отнести:

ü Определение общего IgE.

ü Определение аллерген-специфических IgE.

ü Определение аллерген-специфических IgG (суммарно или только изотипа G4).

ü Определение гистамина, сульфолейкотриенов и других медиаторов аллергических реакций, цитокинов и ферментов воспаления.

ü Оценку уровня экспрессии трансмембранных белков-маркеров активации иммунокомпетентных клеток методом проточной цитометрии.

ü Клеточные тесты и реакции (выявление различных субпопуляций лимфоцитов, участвующих в иммунном ответе, и оценка их функциональной активности).

Синонимы: Аллергочип ImmunoCAP ISAC (112 аллергокомпонентов); Аллергочип ISAC (технология ImmunoCap) – специфические IgE к 112 аллергокомпонентам. 

ImmunoCAP (Immuno Solid-phase Allergy Chip) ISAC (serum); Immuno solid-phase Allergy Chip, ImmunoCAP ISAC, 112 Allergen components; Allergochip ImmunoCAP ISAC, 112 аllergic components. 

Краткое описание исследования «Аллергочип ImmunoCAP ISAC, 112 аллергокомпонентов» 

Инновационная технология мультиплексного твердофазного иммунофлуоресцентного исследования специфических антител класса IgE к широкому спектру аллергенов по их отдельным молекулярным компонентам от ведущего производителя тест-систем для аллергодиагностики (ImmunoCAP, ISAC, Phadia).  

Новый диагностический инструмент для врачей-аллергологов в виде технологии ImmunoCAP ISAC (Phadia) позволяет представить комплексную картину сенсибилизации пациента к наиболее значимым пищевым, ингаляционным и иным аллергенам на уровне их отдельных компонентов, включая специфические и кросс-реагирующие молекулярные структуры. Применение развернутого тестирования, доступного для выполнения с использованием биочиповой технологии единовременно из одной небольшой пробы крови, поможет в диагностически сложных случаях, в дифференциации клинически значимой сенсибилизации, оценке риска локальных или системных реакций при контакте с определенными аллергенами, уточнении рекомендаций по избеганию негативных воздействий, идентификации триггерных компонентов перед началом иммунотерапии. 

С какой целью проводят исследование «Аллергочип ImmunoCAP ISAC, 112 аллергокомпонентов» 

Исследование позволяет получить комплексную картину сенсибилизации к наиболее значимым пищевым, ингаляционным и иным аллергенам на уровне отдельных компонентов, включая специфические и кросс-реагирующие молекулярные структуры. 

Когда целесообразно проводить тест «Аллергочип ImmunoCAP ISAC, 112 аллергокомпонентов» 

Предлагаемое мультиплексное компонентного разрешения тестирование на наличие IgE к выбранным молекулярным компонентам аллергенов не может полностью заменить применение обычных аллерготестов (ИФА, кожные пробы), его целесообразно использовать в качестве дополнительной опции в стандартном алгоритме обследования пациентов: 1 – сбор анамнеза и физический осмотр; 2 – общепринятые кожные пробы или специфические IgE-тесты. 

Состав аллергенов биочипа и краткие дополнительные пояснения по значению отдельных компонентов можно найти в прилагаемом примере бланка ответа. Результаты исследования подлежат клинической интерпретации специалистом-аллергологом.

Литература

Основная литература

1. Федеральные клинические рекомендации по диагностике аллергических заболеваний. Российская ассоциация аллергологов и клинических иммунологов (РААКИ). Москва. 2015.
2. Griffiths R.L.M. Comparison of the Performance of Skin Prick, ImmunoCAP, and ISAC Tests in the Diagnosis of Patients with Allergy. International archives of allergy and immunology. 2017;172(4):215-223.
3. Hamilton R.G. Microarray Technology Applied to Human Allergic Disease. Microarrays. 2017;6(1):3. 
4. Nicolaou N. et al. Allergy or tolerance in children sensitized to peanut: prevalence and differentiation using component-resolved diagnostics. The Journal of allergy and clinical immunology. 2010;125(1):191-197. 
5. Osguthorpe J.D. In vitro allergy testing. International forum of allergy and rhinology. 2014;4:S46-S50. 
6. Westwood M. et al. ImmunoCAP® ISAC and Microtest for multiplex allergen testing in people with difficult to manage allergic disease: a systematic review and cost analysis. Health technology assessment. 2016;20(67):1-178. 
7. Материалы фирмы-производителя реагентов.